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DNA提取是生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中常見的實(shí)驗(yàn)步驟,用于分離和純化DNA以進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)分析。本文將介紹使用天根質(zhì)粒DNA提取試劑盒進(jìn)行質(zhì)粒基因提取的實(shí)驗(yàn)步驟。該試劑盒使用堿裂解法提取質(zhì)粒DNA,具有簡便快速、高效純化的特點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)步驟如下:一、培養(yǎng)細(xì)菌并制備含有質(zhì)粒的細(xì)胞懸液:1.從平板上挑取單克隆細(xì)菌,轉(zhuǎn)入含有3mLLB+Amp100培養(yǎng)基的試管中。使用含有抗生素氨芐青霉素的LB培養(yǎng)基可以選擇性地培養(yǎng)含有質(zhì)粒的細(xì)菌群體。2.在37℃的恒溫?fù)u床上振蕩培養(yǎng)過夜,以促進(jìn)細(xì)菌生長并擴(kuò)增質(zhì)粒。二、...
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DNA,即脫氧核糖核酸,是構(gòu)成生命基礎(chǔ)的分子。我們可以通過瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)來檢測、分離并研究DNA分子。瓊脂糖凝膠電泳是一種重要的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)方法,可以幫助我們了解DNA的結(jié)構(gòu)和功能。本文將帶您了解瓊脂糖凝膠電泳技術(shù),并介紹其在DNA研究中的應(yīng)用。實(shí)驗(yàn)原理在瓊脂糖凝膠電泳中,DNA分子會受到電荷效應(yīng)和分子篩效應(yīng)的影響而遷移。DNA分子在高于其等電點(diǎn)的溶液中具有負(fù)電荷,因此在電場的作用下會向正極移動。所有DNA雙鏈分子幾乎具有相同數(shù)量的凈電荷,因此它們會以相同的速度向正極移...
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細(xì)胞增殖是生物體生長與發(fā)育的基本過程之一,也是很多生命科學(xué)研究領(lǐng)域的重要內(nèi)容。MTT和CCK-8試劑是常用的細(xì)胞增殖檢測方法,它們可以間接評估細(xì)胞數(shù)量,但在原理、應(yīng)用場景、操作方法和試劑穩(wěn)定性方面存在一些不同。本文對MTT和CCK-8方法進(jìn)行了詳細(xì)比較,并探討了它們在細(xì)胞增殖研究中的應(yīng)用。1.MTT和CCK-8細(xì)胞增殖檢測方法在檢測原理上的區(qū)別MTT法的原理是通過細(xì)胞內(nèi)還原酶將乙基四偏磷酸鹽(MTT)轉(zhuǎn)化為具有紫色的可溶性甲酸鹽產(chǎn)物。這種紫色產(chǎn)物可以通過光譜法測量其吸光度,間...
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PCR反應(yīng)中目基因的獲取實(shí)驗(yàn)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆誔CR反應(yīng)的基本原理與實(shí)驗(yàn)技術(shù)。二、實(shí)驗(yàn)原理PCR(PolymeraseChainReaction)-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng),可以選擇性擴(kuò)增一段DNA序列。其基本步驟是,首先將待擴(kuò)增的模板DNA變性使之成為單鏈,DNA樣品中,特異性的引物能夠與其互補(bǔ)的序列雜交,在dNTPs和Taq酶存在時,就可以合成模板DNA的互補(bǔ)鏈,反應(yīng)完成后,將反應(yīng)混合物加熱使DNA雙鏈變性,溫度下降后,過量的引物又可以開始第二輪的合成反應(yīng)。這種延伸-變性-退火-延伸...
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A載體和外源DNA的酶切一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)和掌握核酸的酶切操作原理;通過酶切獲得可進(jìn)行體外重組的載體和外源DNA。二、實(shí)驗(yàn)原理限制性內(nèi)切酶能特異地結(jié)合于一段被稱為限制性酶識別序列的DNA序列之內(nèi)或其附近的特異位點(diǎn)上,并切割雙鏈DNA。絕大多數(shù)限制酶識別長度為4至6個核苷酸的回文對稱特異核苷酸序列(如EcoRⅠ識別六個核苷酸序列:5'-G↓AATTC-3'),有少數(shù)酶識別更長的序列或簡并序列。Ⅱ類酶切割位點(diǎn)在識別序列中,有的在對稱軸處切割,產(chǎn)生平末端的DNA片段(如SmaⅠ:5'...
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